A eficiência de transmissão de Xylella fastidiosa por cigarrinhas em citros é baixa e variável com a espécie vetora. O comportamento alimentar do vetor relacionado à aquisição e inoculação de X. fastidiosa é um dos prováveis fatores condicionantes da eficiência de transmissão. Assim, os objetivos desse trabalho foram avaliar o comportamento de duas espécies de cigarrinhas, Dilobopterus costalimai Young e Oncometopia facialis (Signoret), na seleção de mudas cítricas e de locais de alimentação e verificar a influência das brotações na atratividade aos vetores. Realizaram-se testes de livre escolha em câmaras de observação (63 x 63 x 120 cm) com as duas espécies, liberando-se 40 indivíduos por câmara. Avaliou-se o número de insetos mortos e que escolheram ou não um dos tratamentos, após 3, 15, 21, 24, 39, 45 e 48h da liberação. Para D. costalimai, as folhas foram importantes no início da seleção hospedeira, sendo substituídas com o passar do tempo pelo ramo secundário. D. costalimai preferiu pousar na nervura secundária da folha, seguida pelo ramo secundário. Para O. facialis não houve diferença na preferência para pouso entre folhas (nervura central e secundária) e ramos secundários das mudas cítricas, sendo esta variável com o horário do dia. Comprovou-se que a presença de brotação nas mudas aumenta a atratividade das plantas para as duas espécies de cigarrinhas, elevando as chances de aquisição ou inoculação de X. fastidiosa pelos vetores. Assim, sugere-se adotar medidas de controle desses insetos em períodos de maior vegetação dos pomares de laranja.

The efficiency of Xylella fastidiosa transmission by sharpshooters on citrus plants is low and varies with the vector species. The feeding behavior of the sharpshooter vector related to X. fastidiosa acquisition and inoculation is one of the probable conditioning factors in transmission efficiency. The objective of this study was to assess the behavior of two sharpshooter species, Dilobopterus costalimai Young and Oncometopia facialis (Signoret), in selection of citrus nursery trees and feeding places and to ascertain the influence of sprouting on plant attractiveness to the vectors. Free choice tests were performed with the two species in observation chambers (63 x 63 x 120 cm), releasing 40 individuals per chamber. The number of dead insects were assessed as well as those that chose, or not, one of the treatments, at 3, 15, 21, 24, 39, 45 and 48h after the release. For D. costalimai the leaves were important at the start of host selection, and were substituted over time by the secondary branch. D. costalimai preferred to stay on the secondary leaf nervures followed by the secondary branch. O. facialis showed no difference in preference for staying on the leaves (central and secondary nervures) and secondary branch on citrus plants, and this varied with the time of day. The presence of sprouting in the nursery trees increased the attractiveness of the plant to the two sharpshooter species raising the chances of X. fastidiosa acquisition or inoculation. So, control measures should be adopted against these insects in periods of greater vegetation in orange orchards.

A distribuição espacial das espécies de cigarrinhas (Dilobopterus costalimai Young, Acrogonia sp. e Oncometopia facialis Signoret), vetoras da Xylella fastidiosa, agente causal da Clorose Variegada dos Citros, foi estudada com o uso da geoestatística. As avaliações foram feitas em um pomar comercial de laranja 'Pêra' (Citrus sinensis [L.] Osb.), objetivando estabelecer meios para melhor controle dos vetores e da doença. O monitoramento da ocorrência das cigarrinhas no pomar foi feito através de amostragens mensais, utilizando-se armadilhas adesivas amarelas de 3" x 5", distribuídas uniformemente em 50 pontos na área, dispostas em laranjeiras à altura de 1,5 m do solo e substituídas mensalmente. Acrogonia sp. foi a espécie prevalente nas amostragens. Os resultados possibilitaram ajustar modelos aos semivariogramas da distribuição espacial das três espécies no pomar estudado. Durante os três anos consecutivos de amostragem, as populações de Acrogonia sp., D. costalimai e O. facialis apresentaram modelos de distribuição agregada somente nos meses de verão, inverno e primavera, respectivamente, mostrando a necessidade de monitoramento constante desses vetores para reduzir a sua população em épocas favoráveis ao seu desenvolvimento. Através de parâmetros geoestatísticos foi possível calcular a área de agregação das cigarrinhas no pomar. A espécie Acrogonia sp. apresentou área média de agregação de 15.760 m², enquanto para O. facialis e D. costalimai foi possível constatar áreas médias de agregação de 11.555 m² e 10.980 m², respectivamente. Esses resultados indicaram que para um levantamento seguro de cigarrinhas é necessário pelo menos dispor de uma armadilha por hectare.

The spatial distribution of the three principal species of sharpshooter (Dilobopterus costalimai Young, Acrogonia sp. e Oncometopia facialis Signoret), vectors of Xylella fastidiosa causal agent of Citrus Variegated Chlorosis, was studied by using geostatistics. The evaluations were carried out in a commercial 'Pera' sweet orange (Citrus sinensis [L.] Osb.) grove budded on Rangpur lime (Citrus limonia Osb.) located at Bebedouro, São Paulo state, aiming to establish better means for vector and disease control. The sharpshooters were monitored using with 50 uniformly distributed 3" x 5" yellow sticky traps hanging down in branches at 1.5 m up to the ground, which were replaced monthly. Acrogonia sp. was the prevalent species sampled. The results were used to adjust population models to semivariograms of the spatial distribution of the three sharpshooters species in the grove. During the three consecutive years of sampling, the population of Acrogonia sp., D. costalimai and O. facialis showed an aggregated distribution only during summer, winter and spring, respectively, showing that intensive monitoring of these vectors is necessary to control their population in periods favorable to their development. The aggregation area of the sharpshooters within the orange grove was determined using geostatistic parameters. Acrogonia sp. showed a mean aggregation area of 15,760 m², whereas for O. facialis and D. costalimai, the corresponding areas were 11,555 m² and 10,980 m², respectively. Therefore, in order to obtain a reliable estimate of sharpshooter populations, at least one trap should be used per hectare.

A preservação adequada do DNA de um determinado organismo é fundamental para o sucesso no uso de técnicas moleculares como RAPD-PCR. O objetivo deste trabalho foi comparar métodos simples de preservação de espécimes de Dalbulus maidis (DeLong & Wolcott) (Hemiptera: Cicadellidae) quanto à quantidade e qualidade do DNA para uso em RAPD-PCR, após períodos sucessivos de armazenamento. Avaliaram-se oito métodos: congelamento (-20ºC); álcool etílico 70% (-20ºC e temperatura ambiente); álcool etílico absoluto (-20ºC e temperatura ambiente); secagem ao ar; e preservação em tampão de extração (inseto inteiro e macerado). A intervalos de 10-30 dias, o DNA foi extraído, quantificado e amplificado via RAPD-PCR pelo oligonucleotídeo OPA-04. A qualidade do DNA extraído foi observada em gel de agarose 0,8%. Após 210 dias de armazenamento, o congelamento (-20ºC) mostrou ser a melhor técnica. Quantidades satisfatórias de DNA também foram obtidas dos insetos conservados em álcool etílico absoluto (-20ºC), álcool etílico 70% (-20ºC) e tampão de extração (inseto inteiro e macerado). Insetos conservados em álcool etílico absoluto (temperatura ambiente), em álcool etílico 70% (temperatura ambiente) e secos ao ar mostraram-se impróprios para estudos com RAPD-PCR após 120, 60 e 10 dias de armazenamento, respectivamente.

The appropriate preservation of the DNA of a certain organism is important for successful application of molecular techniques like RAPD-PCR. This study was designed to compare simple methods of preservation of specimens of Dalbulus maidis (DeLong & Wolcott) (Hemiptera: Cicadellidae) with respect to quantity and quality of DNA for use in RAPD-PCR, after different storage periods. Eight methods were tested: freezing (-20ºC); ethyl alcohol 70% (-20ºC and room temperature); absolute ethyl alcohol (-20ºC and room temperature); air-dry; and preservation in extraction buffer (whole and homogenized insect). At intervals of 10 to 30 days, insect DNA was extracted, quantified and amplified through RAPD-PCR using primer OPA-04. The quality of extracted DNA was observed on 0.8% agarose gel. After 210 days of preservation, freezing (-20ºC) showed to be the best method. Satisfactory quantities of DNA were also obtained from insects conserved in absolute ethyl alcohol (-20ºC), ethyl alcohol 70% (-20ºC) and extraction buffer (whole and homogenized insect). Insects conserved in absolute ethyl alcohol (room temperature), ethyl alcohol 70% (room temperature) and air-dry conditions were inappropriate for RAPD-PCR studies after 120, 60 and 10 days of storage, respectively.

O objetivo do trabalho foi testar a hipótese de que a cigarrinha Dalbulus maidis (Hemiptera: Cicadellidae) serve como reservatório natural dos molicutes (Spiroplasma kunkelii e fitoplasma) que infetam o milho (Zea mays) no Mato Grosso do Sul, após períodos prolongados de pousio. Nas safras 1997/98 e 1998/99, avaliou-se a infetividade natural de migrantes desse inseto vetor em plantios de primavera (novembro/dezembro) da região de Anastácio (MS), onde não se cultiva o milho na entressafra (abril a setembro), em duas situações distintas: (A) áreas onde o milho era plantado anualmente a partir de outubro, e (B) áreas onde o milho não era cultivado há vários anos. Cigarrinhas foram coletadas no campo e confinadas em plântulas sadias de milho, em casa de vegetação, para a inoculação dos patógenos. Após 50-60 dias, as plantas-teste foram avaliadas quanto a sintomas diagnósticos de S. kunkelii e por PCR para detecção de fitoplasma. Através dos bionsaios de transmissão, detectou-se S. kunkelii e fitoplasma em 2 a 20% e 1 a 4% dos indivíduos coletados, respectivamente. O aparecimento de adultos infetivos logo após a germinação da cultura, inclusive nas áreas onde o milho não era cultivado há vários anos, sugere que os molicutes foram transportados na entressafra por indivíduos migratórios de D. maidis.

This study was designed to test the hypothesis that Dalbulus maidis (Hemiptera: Cicadellidae) serves as a natural source of mollicutes (Spiroplasma kunkelii and phytoplasma) that infect maize (Zea mays) following overseason in the State of Mato Grosso do Sul (MS), Brazil. The natural infectivity of D. maidis migrants was evaluated in spring plantings of 1997 and 1998 in the region of Anastácio (MS), where maize is not cultivated from April to September. Live leafhoppers were sampled in areas where: (A) maize was planted annually in the spring (October/December), and (B) maize had not been cultivated for several years. In a greenhouse, the leafhoppers were confined to healthy maize seedlings for pathogen inoculation. Two months later, the test plants were rated for diagnostic symptoms of S. kunkelii and tested by PCR for phytoplasma infection. Based on the transmission bioassays, S. kunkelii and phytoplasma were detected in 2 to 20% and 1 to 4% of the collected individuals, respectively. The appearance of infective adults soon after maize germination, even in the areas where maize had not been cultivated for several years, suggests that the mollicutes were transported in the overseason by migratory individuals of D. maidis.

The development of immature stages on citrus seedlings was studied for the sharpshooter leafhoppers Dilobopterus costalimai Young, Oncometopia facialis (Signoret) and Homalodisca ignorata Melichar. The former two species are vectors of Xylella fastidiosa to citrus. Eggs of the three species are laid underneath the epidermis in the abaxial leaf surface. The Proconiini species (O. facialis and H. ignorata) coat their eggs with a whitish powder. Mean egg incubation periods at 25±2(0)C were 11.8 and 9.5 days for D. costalimai and O. facialis, respectively. Nymphal development was observed under fluctuating temperatures in a greenhouse after confining newly hatched first-instar leafhoppers on seedling stems inside leaf cages (54x42x12 mm). Five instars were observed and the mean durations of the nymphal stage were 64.7, 76.2 and 53.1 days for D. costalimai, O. facialis and H. ignorata, respectively.